THE BREEDER'S SHOP: LA PRATIQUE DU FROTTIS VAGINAL EN ELEVAGE

MATERIEL NECESSAIRE:

- Kit Diagnœstrus A

- Kit Diagnœstrus B

- Cytofixateur

- Ecouvillons

- Microscope

- Lame de verre pour microscope

- Eau stérile

- Un verre

- Champs de soins

- Minuteur

- Gants à usage unique

Matériel disponible sur : www.breedershop.com

TEMPS NECESSAIRE:

Environ 20 minutes.

Avantages du frottis vaginal en élevage :

- Permet de suivre les chaleurs en identifiant la phase du cycle.

- Déterminer le début et la fin de l’œstrus, phase où se produit l’ovulation. Ceci permet :

De ne pas accoupler les sujets trop tôt et/ou trop longtemps.
De programmer plus précisément la mise- bas.
D’optimiser le taux de remplissage en étant sûr d’avoir accouplé au bon moment

- Possibilité d’identifier les « fausses chaleurs » caractérisé par un œstrus très court ou quasi absent

- En cas de nécessité d’effectuer un dosage de Progestérone (pour des saillies extérieures), l’identification du début de l’œstrus permet d’économiser des dosages trop précoces.

- Indépendance en élevage (pas de frais vétérinaire, coût de transport, temps passé).

Quand commencer le Frottis vaginal ?

Il est indiqué d’effectuer le premier frottis au 5ème jour des chaleurs. En cas de doute sur la date du début des chaleurs, effectuer immédiatement un frottis.

Si le frottis monte très peu de cellules kératisés (rouge-marron), effectuer le frottis suivant 2-3 jours plus tard.

La méthode de prélèvement :

Le prélèvement s’effectue à l’aide d’un écouvillon. L’écouvillon peut être humidifié avec du sérum physiologique stérile si la chienne présente des écoulements vaginaux insuffisants. De plus, lorsqu’on utilise du matériel non humidifié, le coton collecte les cellules mais également du mucus, ce qui peut rendre l’étalement du prélèvement plus difficile.

Les lèvres vulvaires sont écartées manuellement avec le pouce et l’index. L’écouvillon est introduit, orienté en direction de la colonne vertébrale. Appuyer suffisamment sur la paroi de la muqueuse et effectuer des rotations de l’écouvillon. Puis retirer délicatement l’écouvillon des voies génitales.

Certaines précautions sont nécessaires pour éviter des erreurs :

En orientant l’écouvillon en direction de la colonne vertébrale, on évite d’effectuer un prélèvement dans la fosse clitoridienne. En effet, des cellules fusiformes kératinisées sont fréquemment prélevées dans cette zone et peuvent être confondues avec des cellules superficielles kératinisées observées lors de l’œstrus pour un œil non averti.
Le prélèvement sur la partie dorsale du vestibule ou du vagin évite tout traumatisme du méat urétral.

Etaler votre prélèvement sur une lame de microscope rapidement, afin d’éviter son dessèchement. L’écouvillon est roulé sur une lame propre sans frottement pour ne pas détériorer les cellules. Il ne faut pas glisser l’écouvillon sur la lame mais y déposer le prélèvement par un mouvement de rotation. Généralement deux à trois lignes parallèles, bien séparées, peuvent être étalées sur toute la longueur d’une seule lame. Il faut veiller de ne pas superposer deux lignes d’étalements car cela gênerait et fausserait la lecture du frottis. Il est préférable que le prélèvement ainsi que l’étalement soit réalisé par le même manipulateur au court du suivit de chaleur de la chienne concerné. Le changement d’opérateur pourrait fausser le résultat.

La fixation du prélèvement:

Le frottis doit être fixé immédiatement (dans les quelques secondes qui suivent l’étalement sur la lame), alors qu’il est encore humide. En effet, si l’air assèche les lames, les cellules peuvent se distordre. Pour fixer le prélèvement, il suffit de vaporiser la lame avec un spray cytofixateur.

La coloration de Harris Shorr :

L’intérêt de cette technique est la coloration orangée des précurseurs cytoplasmiques de la kératine. La lecture est aisée, car les cellules basophiles apparaissent bleues, et les cellules acidophiles rouges orangées. Dans le suivi du cycle sexuel chez la chienne, la coloration de Harris Shorr est la coloration de choix. Les cellules acidophiles deviennent rouge orange alors que la kératinisation progresse.

L’observation microscopique :

L’observation de la lame se fait en deux temps :

- D’abord, un faible grossissement (x40 ou x100) permet d’apprécier globalement la richesse en cellules ainsi que leur répartition (dispersées, en amas ou isolées), la réussite de la coloration. Cette première visualisation donne également la tendance tinctoriale du frottis (globalement basophile, acidophile, ou « mixte »).

- Puis un fort grossissement (x400) nous donne des informations beaucoup plus précises sur les types cellulaires rencontrés. La morphologie et la couleur de la cellule, la taille et l’aspect du noyau sont des informations primordiales pour reconnaître le type cellulaire rencontré.

Interprétation du prélèvement :

Vocabulaire : Coloration basophile en Bleu / Coloration acidophile en Rouge-marron